Post by account_disabled on Jul 26, 2023 9:37:48 GMT
48 小时。之后，用PBS洗涤细胞并用胰蛋白酶收获。细胞沉淀用冰冷的 70% 乙醇固定 1 小时，并在 -20 °C 下孵育过夜。细胞沉淀用碘化丙啶溶液（ThermoFisher Scientific）在 37°C 下染色 1 小时。使用流式细胞术(NovoCyte)分析DNA含量。 对于膜联蛋白-V 测定，细胞在 6 孔板中生长，用 ASO 转染 48 小时，然后用 PBS 洗涤并用胰蛋白酶收获。白-V (Trevigen) 在黑暗中室温孵育 15 分钟。将 400 μl 1 × 结合缓冲液添加到细胞中，并使用流式细胞
性对照。 天然 RNA Pull-down 测定 如前所述进行HIF1A-As2的天然 RNA Pull-down 测定[ 13 ]。引物列于补充表 2中。 免疫共沉淀 (Co-IP) 如前所述进行 Co-IP 测定[ 13 ]。抗体列于补充表 4中。 MTS 细胞国家电子邮件列表活力和 IncuCyte 细胞生长分析 将5.0×10 3 个细胞培养在96孔板中。使用 CellTiter 96 Aqueous One Solution 细胞活力测定 (Promega) 评估细胞活力，并在多标记计数器 (SpectraMax M5) 中于 490 nm 处进行
测量。 使用 Essen Bioscience 的 IncuCyte Zoom 活细胞成像系统分析细胞汇合度。将预处理的细胞接种到 96 孔板中，每 2 小时拍摄一次相差图像，总共 72 小时，并使用 Incucyte Zoom 软件计算汇合百分比。 细胞周期分析和膜联蛋白-V 测定 对于细胞周期分析，H1299 细胞用 ASO 转染的新型基于mRNA的疗法将在不久的将来成为癌症治疗的关键策略。